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大腸杆菌顯色培養基較傳統使用的SMAC培養方法,特異性和靈敏度更高,用於從臨床和非臨床樣品中選擇性分離產誌賀毒素的大腸杆菌,如臨床樣本(糞便)、食品和乳品樣本等。
大腸杆菌顯色培養基中的蛋白腖和酵母提取物提供氮源和碳源化合物、長鏈氨基酸、維生素和其他必需營養素;緩衝鹽提供緩衝作用;選擇性添加劑抑製革蘭氏陽性菌和其他汙染菌群的生長。混合顯色劑使產誌賀毒素大腸杆菌菌落呈紫紅色至紫色。產誌賀毒素的大腸杆菌O157通常不發出熒光,而產誌賀毒素大腸杆菌非O157血清型是發熒光的(少數可能不發光)。其他腸杆菌科菌落顯示為無色或藍色或被抑製。由於產誌賀毒素大腸杆菌血清型複雜,且可能存在抗生素作用產生的變異型,大腸杆菌顯色培養基對於產誌賀毒素大腸杆菌還需要進行生化和血清學檢驗以確認鑒定結果。
大腸杆菌顯色培養基的實驗原理:
蛋白腖提供碳源和氮源;膽鹽抑製革蘭氏陽性菌的生長;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養基的凝固劑;混合碳水化合物為可發酵的糖類;中性紅是pH指示劑,細菌發酵糖產酸時菌落呈桃紅色;亞碲酸鉀抑製非大腸杆菌O157:H7菌的生長;混合色素與大腸杆菌O157:H7所具有的酶發生特異性反應,水解底物,釋放出顯色基團,在淺紅色平板上產生藍綠色的菌落。
大腸杆菌顯色培養基的用法:
稱取本品 50.1g 加入1000ml蒸餾水,加熱溶解並不停攪拌,煮沸不要超過1分鍾。分裝三角瓶,121℃高壓滅菌15分鍾。取1ml製備好的樣品液加入直徑為9cm無菌平皿中心,傾入冷卻至45-50℃培養基約15ml,混勻,凝固後,36±1℃倒置培養18~24h。或冷卻至45-50℃時,傾入無菌平皿,瓊脂*凝固後,在37℃的培養箱中倒置放置1-2小時,加入適當稀釋度的樣品液1ml,塗布於大腸杆菌顯色培養基上,36±1℃培養18~24h。