觸酶試驗酶液製備的實驗步驟

點擊次數：1287 更新時間：2022-10-27

　　觸酶試驗是關於觸酶的一個實驗做法。大多需氧和兼性厭氧菌均產生過氧化氫酶，但鏈球菌屬陰性，故常用此試驗來鑒定。分枝杆菌的鑒別則用耐熱觸酶試驗，結核分枝杆菌為陰性，戈氏分枝杆菌和地分枝杆菌為陽性。

　　觸酶試驗酶液的製備：

　　1.稱取葉片 0.25g ，加入5倍量的(M/V)pH7.0 的PBS冰浴研磨 15000r/min

　　離心15min取部分上清液經適當稀釋後用於酶活性測定。

　　2.CAT活性的測定

　　在3ml的反應體係中，包括0.3% H2021ml, H20 1.95ml, 最後加入0.05ml酶液

　　啟動反應，測定波長240nm處的OD降低速度。將每分鍾OD減少0.01定義為1個活力單位。

　　3.POD活性的測定

　　在3ml的反應體係中，包括0.3% H2021ml, .0.2% 愈創木酚0.95ml,pH7.0的PBS 1ml，最後加入0.05ml酶液啟動反應，記錄470nm處OD增加速度。將每分鍾OD增加0.01定義為1個活力單位。

　　4. 用考馬斯亮藍 G-250法測定蛋白含量。