开云体育意甲20100 腸杆菌鑒定試劑盒API20E

REF 20 100 / 20 160 07584E - CN - 2004/05

® 20 E

腸杆菌和其它革蘭(lan) 氏陰性杆菌鑒定係統

概要說明

API 20 E 是腸杆菌科和其它非苛養(yang) G-杆菌的標準鑒定係

統 包括 21 個(ge) 標準化微型生化測試和鑒定資料庫 可鑒定

的菌譜名錄 請參考說明書(shu) 後的鑒定表

原理

API 20 E 試驗條是由 20 個(ge) 含幹燥底物的小管所組成 這些

測定管用細菌懸浮液接種 培養(yang) 一定時間後 通過代謝作

用產(chan) 生顏色的變化 或是加入試劑後變色而觀察其結果

根據說明表判讀反應 參照分析圖索引或使用鑒定軟件得

到鑒定結果

試劑盒內(nei) 容物

25  測試試劑盒 ( 貨號. 20 100)

- 25 API 20 E 試條

- 25 培養(yang) 盒

- 25 結果報告單

- 1 個(ge) 封口夾

- 1 份產(chan) 品說明書(shu)

100 測試試劑盒 ( 貨號. 20 160)

- 100 API 20 E 試條 (4x25 試條)

- 100 培養(yang) 盒

- 100 結果報告單

-  1 個(ge) 封口夾

-  1 份產(chan) 品說明書(shu)

試條的成分

API 20 E 試條的成分請參閱說明書(shu) 後的結果判讀表

必需但未提供的試劑和材料

試劑

- 0.85 % API NaCl 培養(yang) 基 5 ml (Ref. 20 230) or

API 懸浮培養(yang) 基 5 ml (Ref. 20 150)

- API 20 E 附加試劑盒 (Ref. 20 120) 或

單個(ge) 的附加試劑  TDA (Ref. 70 402)

JAMES (Ref. 70 542)

VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422)

NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)

- Zn 試劑 (Ref. 70 380)

- 氧化酶 (Ref. 55 635*)

* 目錄中沒有銷售的國家 請使用相近的試劑

- 礦物油 (Ref. 70 100)

- API 20 E 數值分析圖譜(Ref. 20 190) 或

鑒定軟件

材料

- 吸管或 PSI 管

- 安瓿開啟器

- 安瓿架

- 微生物實驗室一般設備

可能需要的附加試劑

- API OF 培養(yang) 基 (Ref. 50 110) :

用於(yu) 測定發酵型或氧化型代謝作用

- API M 培養(yang) 基 (Ref. 50 120) :

用於(yu) 測定兼性厭氧菌的運動性

警告和注意

•  僅(jin) 供體(ti) 外診斷和微生物質控使用

•  僅(jin) 供專(zhuan) 業(ye) 人員使用

• 此試劑盒中含有動物源性成分 已知所使用原始材料和動

物的衛生狀況不能*保證其不含傳(chuan) 染性的物質 因此我

們(men) 建議所有樣品應被視為(wei) 具有傳(chuan) 染性 並應按通常的安全

措施對其進行正確處理 勿吸入或咽下

• 所有標本 細菌培養(yang) 物 接種物應被視為(wei) 具有傳(chuan) 染性並

應進行正確處理 在整個(ge) 試驗過程中 要遵守無菌技術要

求和通常使用的防範措施 可參照 NCCLS M29-A 保

護試驗室工作人員免受儀(yi) 器生物公害和通過血液 體(ti) 液

組織傳(chuan) 染的疾病的侵害-當前版本 的內(nei) 容 另外的防護

措施 可參照 微生物和生物醫學實驗室的生物研究安全

-CDC/NIH – 新版本 或參照各國正在使用的規章執

行

• 不要使用過期的試劑

• 使用前 請檢查包裝和成分是否完整

• 不要使用已經破損的試條 杯子破壞 幹燥劑小袋已打開

等

• 有關(guan) 產(chan) 品性能的數據均由嚴(yan) 格按照作步驟所進行的試驗得

出 任何操作步驟的改變或偏離均會(hui) 影響試驗結果

• 試驗結果的判斷應由合格的微生物家所作 同時應將病

史 標本來源 菌落和顯微形態考慮在內(nei) 如有可能 再

作一些附加試驗 尤其是抗生素敏感譜

儲(chu) 存條件

試驗條采用鋁袋包裝並附有幹燥劑

一旦打開鋁袋(*) 請使用封口夾(試劑盒已含有)重新封口

以保證試條的幹燥 把鋁袋撕開處末端放入打開的夾子並

小心的加緊兩(liang) 端 開啟鋁袋後 在 2-8 環境下 試驗條可

享有 10 個(ge) 月的有效期(或包裝盒上的有效期 以較短時間

為(wei) 準)

(*) 建議開封的方法 在封口下方剪開鋁箔裝 為(wei) 防止意外

損壞幹燥劑 開封時應保持鋁箔袋垂直

標本  采集和前處理

API 20 E 不能直接用於(yu) 臨(lin) 床或其他標本

需要進行鑒定的微生物必須首先根據標準微生物處理技術

於(yu) 適合腸杆菌和/或非苛養(yang) 革蘭(lan) 氏陰性杆菌的培養(yang) 瓊脂 例

如 麥康凱 上培養(yang) 分離

IVD

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api ® 20 E  07584E –  CN - 2004/05

bioMérieux ® SA 中文 - 2

使用說明

氧化酶試驗

必須按照製造商的使用說明進行氧化酶試驗 由於(yu) 它是

終圖譜的主要數據 請將其記錄於(yu) 結果報告單上 第二十

一個(ge) 試驗

試條的準備

• 準備一個(ge) 培養(yang) 盒 盤和蓋子 倒入約 5ml 蒸餾水或軟化

水[或其它不含雜質或產(chan) 生揮發性氣體(ti) 的化學物質 如

Cl2, CO2,等 ]於(yu) 盤的蜂窩小凹中 造成一個(ge) 濕室

• 在盤的沿邊寫(xie) 上菌株號(不要寫(xie) 在蓋上 以免錯放)

• 從(cong) 包裝中取出試驗條放到盤中

• 將試條置於(yu) 孵育箱內(nei)

注意 API 20 E 隻能用於(yu) 腸道細菌和或非苛養(yang) 的 G- 杆菌

苛養(yang) 菌主要指對營養(yang) 需求有特殊需要的菌(例 布魯氏菌屬

Brucella 和 法朗西絲(si) 菌屬 Francisella) 這些菌沒有包括在

API 20 E 數據庫中 必須采用有效方法 排除這些菌的存

在

接種物的準備

• 根據"警告及注意"一欄所列方法打開一安瓿 API 0.85%

NaCl 培養(yang) 基 (5ml)或一安瓿 API 懸浮培養(yang) 基(5 ml) 或

使用 5ml 0.85 %無雜質 無菌鹽水

• 用吸管或接種針從(cong) 分離物的平板上挑取單個(ge) 分純菌落至懸

浮基物中 建議使用新鮮培養(yang) 18-24 小時

• 仔細研勻以達到均一的細菌懸液

製備好的菌懸液必須立即使用

注意 大多數弧菌 Vibrio 均嗜鹽 如懷疑菌株為(wei) 弧菌

請使用 0.85% NaCl (5ml) 培養(yang) 基

試條的接種

• 用同一根吸管 將菌懸液充滿 CIT VP 和 GEL 管

的管部和杯部

• 其它管僅(jin) 充滿管部(不是杯部)

• ADH, LDC, ODC, H 2 S 和 URE 管 用礦物油覆蓋 以形

成厭氧環境

• 蓋上培養(yang) 盒

• 於(yu) 36°C ± 2°C 孵育 18-24 小時

判讀和解釋

試條的判讀

• 孵育後 根據使用手冊(ce) 中的讀數表判讀各反應結果

• 如果 3 個(ge) 或 3 個(ge) 以上測定 GLU 試驗+或- 為(wei) 陽性結果

記錄所有自發反應於(yu) 結果報告單上並觀察需要附加試劑的

試驗的結果

- TDA 試驗 加 1 滴 TDA 試劑  深褐色為(wei) 陽性反應 記

錄於(yu) 報告單上

- IND 試驗 加 1 滴 JAMES 試劑 反應立即發生  粉紅

色出現在整個(ge) 反應應管者為(wei) 陽性 記錄於(yu) 報告單上

- VP 試驗 加 1 滴 VP 1 和 1 滴 VP 2 試劑 至少等待

10 分鍾  淺粉或 紅色表明為(wei) 陽性結果 記錄於(yu) 報告單

上 如 淺粉紅色在 10 至 12 分鍾內(nei) 出現 判斷結果為(wei) 陰

性

注意 吲哚產(chan) 生試驗必須後進行 因為(wei) 該反應釋放的氣

體(ti) 產(chan) 物會(hui) 幹擾試條的其他試驗 在加入附加試劑後 請小

心勿調換培養(yang) 盒蓋

• 如果加入附加試劑前陽性結果 包括 GLU 試驗 的數量

少於(yu) 3 個(ge)

- 重新培養(yang) 24 小時 ± 2小時 且不要加任何試劑

- 重新進行需要加入附加試劑的測試 如前說明

- 為(wei) 了完成鑒定 可能需要進行補充試驗 參考有關(guan) 鑒定

的段落

解釋

鑒定結果從(cong) 數字索引中獲得

• 所得的反應結果編為(wei) 數字圖譜

所得反應的類型必須以數字化形式記錄在報告單 每 3 個(ge)

測定為(wei) 一組 每個(ge) 以 1 2 和 4 標明 在每組中 陽性反

應以相應的數字相加 由 API 20 NE 的 20 個(ge) 測定可得一

個(ge) 7 位數 氧化酶反應構其第 21 個(ge) 反應 如陽性則為(wei)

4

• 鑒定

使用數據庫 (V4.0)進行鑒定

* 根據數字圖譜

- 從(cong) 使用手冊(ce) 的讀數表中尋找數字圖譜

* 使用鑒定軟件

- 在鍵盤上輸入 7 位阿拉伯數字的圖譜

在某些情況下 7 位數檢索編碼還不能區分細菌 必須進行

以下一些補充試驗

- 硝酸鹽還原到亞(ya) 硝酸鹽(NO2)和氮氣(N2) 各加一滴 Nit

1 和 Nit 2 試劑於(yu) 葡萄糖 GLU 管內(nei) 待 2~3 分鍾後  紅

色表示 陽性結果(NO2) 陰性反應 黃色 可能由於(yu) 還原

至 N2 有時還有氣泡 加 2-3mg 鋅粉到葡萄糖 GLU

管 5 分鍾後 如果管保持 黃色表示 陽性結果(N2) 記錄

於(yu) 報告單 如果測定變 粉紅 這明是 陰性反應 硝酸鹽仍

留管內(nei) 被鋅粉還原 該反應用於(yu) 檢測革蘭(lan) 陰性 氧化酶

陽性的杆菌

注意 出於(yu) 和吲哚試驗同樣的原因 參考 試條的判讀

中的注意項 硝酸鹽還原試驗必須後進行

- 動力 (MOB) 接種一安瓿 API M 培養(yang) 基 參見產(chan) 品說明

書(shu)

- 麥康凱 MacConkey 培養(yang) 基生長實驗(McC) 接種一個(ge)

麥康凱 MacConkey 平板 參見產(chan) 品說明書(shu)

- 葡萄糖氧化 (OF-O) 接種一安瓿 API OF 培養(yang) 基 參見

產(chan) 品說明書(shu)

- 葡萄糖發酵 (OF-F) 接種一安瓿 API OF 培養(yang) 基 參見

產(chan) 品說明書(shu)

這些在數值編碼本開始部分有所介紹的補充試驗 可以組

成 9 位數的數值索引 從(cong) 而可以用鑒定軟件獲得鑒定結

果

5 315 173 (57) Enterobacter gergoviae

如果分辨率很低 提議進行進一步的試驗 請參考鑒定軟

件或數值分析索引

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質 量 控 製

培養(yang) 基 試驗條和試劑在有效期內(nei) 不同階段需作係統的質量控製 對進行質控實驗室 推薦標準菌株 1.  大腸埃希菌

Escherichia coli ATCC ® 25922 或以下菌株之一

2.  嗜麥芽糖寡養(yang) 單胞菌 Stenotrophomonas maltophilia

ATCC 51331

3.  陰溝腸杆菌 Enterobacter cloacae

ATCC 13047

4.  奇異變形杆菌 Proteus mirabilis

ATCC 35659

5.  肺炎克雷伯菌肺炎亞(ya) 種 Klebsiella pneumoniae ssp

pneumoniae  ATCC 35657

ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA.

ONPG ADH LDC ODC CIT H 2 S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA NO 2 N 2 *

1. + – + + – – – – + – – + + – + + – + – + + –

2. + – V – V – – – – – + – – – – – – – – – – –

3. + + – + + – – – – + – + + – + + + + + + + –

4. – – – + V + + + – – V + – – – – V – – – + –

5. + – + – + – V – – V – + + + + + + + + + + –

* ATCC 13047 和 ATCC 25922 菌株可能會(hui) 觀察到 N 2 (+)結果

• ATCC 51331 菌株於(yu) 胰酶大豆血瓊脂上孵育 24-48 小時 可以獲得反應圖譜

• 其他的菌株於(yu) 胰酶大豆血瓊脂上孵育 18-24 小時 可以獲得反應圖譜

• 請使用 API NaCl 0.85 % 培養(yang) 基製備菌懸液

根據當地相應的規定進行質量控製是使用者的責任

方法 的 局限 性

• API 20 E 鑒定係統能準確鑒定在鑒定範圍 請查閱該說

明書(shu) 後的鑒定表 內(nei) 的腸道細菌和非苛養(yang) 革蘭(lan) 氏陰性杆

菌菌種 但不能用於(yu) 鑒定/排除鑒定範圍外的微生物

• 由於(yu) 在反應原理上 API 技術與(yu) 傳(chuan) 統技術間存在差異 有可

能出現與(yu) 常規方法不同的生化反應結果 同時由於(yu) 所用底

物的差異亦造成陽性反應百分比的不同

• 在某些非常罕見的情況下 某些微生物如克雷伯菌屬

Klebsiella 或變形菌屬 Proteus 與(yu) 葡萄糖的反應可

能會(hui) 由陽性轉變為(wei) 陰性 例如可以觀察到藍綠色變化 這

個(ge) 反應將記錄為(wei) 陰性反應 這種情況已經被反映到鑒定表

中的鑒定百分率上

• 如 果 鑒 定 為(wei) 沙 門 菌  Salmonella  或 誌 賀 菌

Shigella 請進行血清學鑒定以確認鑒定結果

• 分離自膽囊纖維化病人的非發酵革蘭(lan) 陰性杆菌可能會(hui) 產(chan) 生

不典型的生化圖譜 影響鑒定的結果

• 必須使用單個(ge) 微生物的純培養(yang)

預 期 值範圍

參閱在本說明書(shu) 尾部的 反應鑒定表 以取得有關(guan) 各種生

化反應陽性率的資料

性能

• 腸杆菌

對共 5514 株 本產(chan) 品鑒定範圍內(nei) 的 不同來源的臨(lin) 床及

收藏菌株鑒定結果顯示

- 92.80 % 的菌株可被準確鑒定 需要或不需附加檢測

- 4.61 % 的菌株無法鑒定

- 2.59 % 的菌株被錯誤鑒定

• 其它非苛養(yang) 革蘭(lan) 陰性杆菌

對共 2386 株 本產(chan) 品鑒定範圍內(nei) 的 不同來源的臨(lin) 床及

收藏菌株鑒定結果顯示

- 90.32 % 的菌株可被準確鑒定 需要或不需附加檢測

- 6.16 % 的菌株無法鑒定

- 3.52 % 的菌株被錯誤鑒定

廢 物處理

所有使用或未使用的試劑和其他汙染性材料應遵循傳(chuan) 染性

或潛在傳(chuan) 染性產(chan) 品的處理程序

每個(ge) 實驗室都有責任根據其實驗的類型和危險性級別進行

廢物和汙物的處理 同時要嚴(yan) 格依照有關(guan) 的規定對待和處

理所有的廢物和汙物

擔保

生物开云体育意甲 bioMérieux 拒絕任何形式的擔保 明確的或暗

指的 包括任何暗含的商業(ye) 性和具有特殊用途適用性的擔

保 生物开云体育意甲 bioMérieux 將不對任何偶然的和相因而生

的損害承擔義(yi) 務 生物开云体育意甲也不會(hui) 對任何使用者提出的

超過其用於(yu) 支付購買(mai) 生物开云体育意甲產(chan) 品或服務的償(chang) 還要求承

擔義(yi) 務

結 果 判 讀 表

結果

試驗 有效成分

量

(mg/cup.)

反應/ 酶

陰性 陽性

ONPG

鄰硝基苯-半乳糖苷

0.223

β-半乳糖苷酶 無色 黃色(1)

ADH 精氨酸 1.9 精氨酸雙水介酶 黃色 紅/橙色(2)

LDC 賴氨酸 1.9 賴氨酸脫羧酶 黃色 橙色(2)

ODC 鳥氨酸 1.9 鳥氨酶脫羧 黃色 紅/橙色(2)

CIT 檸檬酸鈉

0.756

檸檬酸利用 淡綠/黃 蘭(lan) 綠/蘭(lan) (3)

H2S 硫代硫酸鈉 0.075 H2S 產(chan) 生 無色/微灰 黑色沉澱/細線

URE 脲素 0.76 脲酶 黃色 紅/橙色(2)

TDA /立即

TDA 色氨酸

0.38

色氨酸脫氨酶

黃色 深褐

JAMES / 立即

IND 色氨酸

0.19

吲哚產(chan) 生

無色/淺綠/黃色

粉紅

VP 1 + VP 2 / 10 分鍾

VP 丙酮酸鹽 1.9

3-羥基丁酮產(chan) 生乙酰甲基甲

醇

無色 粉紅/紅色 (5)

GEL

Kohn 明膠 0.6 明膠酶 黑色素不擴散 黑色素擴散

GLU

葡萄糖

1.9 發酵/氧化(4)

蘭(lan) /蘭(lan) 綠 黃色

MAN

甘露醇

1.9 發酵/氧化(4)

蘭(lan) /蘭(lan) 綠 黃色

INO

肌醇

1.9 發酵/氧化(4)

蘭(lan) /蘭(lan) 綠 黃色

SOR

山梨醇

1.9 發酵/氧化(4)

蘭(lan) /蘭(lan) 綠 黃色

RHA

鼠李糖

1.9 發酵/氧化(4)

蘭(lan) /蘭(lan) 綠 黃色

SAC

蔗糖

1.9 發酵/氧化(4)

蘭(lan) /蘭(lan) 綠 黃色

MEL

密二糖

1.9 發酵/氧化(4)

蘭(lan) /蘭(lan) 綠 黃色

AMY

苦杏仁苷

0.57 發酵/氧化(4)

蘭(lan) /蘭(lan) 綠 黃色

ARA

阿拉伯糖

1.9 發酵/氧化(4)

蘭(lan) /蘭(lan) 綠 黃色

OX (看氧化酶試驗說明書(shu) ) 細胞色素氧化酶 (看氧化酶試驗說明書(shu) )

(1)  出現淺黃色應判斷為(wei) 陽性結果

(2)  孵育 36-48 小時後 出現橙色應判斷為(wei) 陰性結果

(3)  讀小杯頂部的結果 需氧

(4)  發酵始於(yu) 小管的底部 氧化開始於(yu) 杯部

(5)  10 分鍾後出現的淺粉紅色應判斷為(wei) 陰性結果

• 標示的量可能因使用原料的濃度不同而有所調整

• 某些杯含有動物源性產(chan) 品 特別是蛋白腖

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